W6 - Embriões de peixe zebra como modelos alternativos: avaliação de neurotoxicidade

Marta Monteiro (Departamento de Biologia e CESAM, Universidade de Aveiro) e Inês Domingues (Departamento de Biologia e CESAM, Universidade de Aveiro)

- Preço: 10 €

- Téorico + Prático

- Limite Máximo de Participantes: 10

- Horário: 30 de Março, 9:00 - 17:30h

Recentemente têm sido feitos esforços à escala internacional para se legislar e controlar o uso de animais em trabalhos científicos (principalmente vertebrados). As autoridades reguladoras emitiram já diretrizes internacionais (como por exemplo a Diretiva 86-609-CEE) que estão a começar a ser implantadas e que visam implementar a política dos “3 Rs”, a qual visa:

                 -Redução (do inglês reduction) do número de animais usados nos ensaios laboratoriais (através da optimização do desenho experimental, partilha de dados entre grupos de investigação, realização de ensaios preliminares com modelos não animais).

                  -Refinamento (do inglês refinement) dos ensaios, introduzindo modificações dos procedimentos experimentais com vista à diminuição do stress e da dor e aumento do bem-estar animal.

                  -Substituição (do inglês replacement) dos testes com animais por modelos alternativos, como por exemplo, culturas de células e tecidos, uso de invertebrados ou estádios embrionários de vertebrados como modelos.

Como resposta a esta problemática, muitos investigadores têm vindo a investigar se os testes com ovos ou estádios embrionários de peixes (os quais não são considerados “animais sencientes” ao abrigo da diretiva em vigor) poderão servir como modelo alternativo ao uso de peixes adultos. Assim, no caso dos ovos de Danio rerio (peixe zebra) há já muito trabalho desenvolvido que aponta para que este novo modelo além de poder substituir a utilização de peixes adultos tem ainda numerosas outras vantagens (Scholz et al., 2008). Esta espécie tem vindo a ser muito usada em laboratório em estudos de desenvolvimento embrionário, fisiologia, genética e toxicologia. É também um organismo modelo na avaliação de risco ecotoxicológico de químicos (Lele and Krone, 1996). É fácil de reproduzir em laboratório e tem o seu genoma sequenciado. Os embriões de peixe zebra têm também algumas particularidades que os tornam num modelo vantajoso quando comparado com outras espécies de peixes, nomeadamente a possibilidade de obter um grande número de ovos para os ensaios; o facto de os ovos não serem mucilaginosos e serem transparentes (o que os torna muito fáceis de manusear e observar) e o rápido desenvolvimento embrionário (em 48 h eclode uma larva).

O teste com embriões de peixe zebra segue a norma nº 236 da OCDE (Organização para a Cooperação e Desenvolvimento Económico) denominada “Fish Embryo Toxicity test”  (FET) e pretende avaliar o efeito de uma substância tóxica no desenvolvimento embrionário do peixe zebra durante 4 dias após a fertilização. Os Parâmetros avaliados são primeiramente a mortalidade e o desenvolvimento embrionário (e.g.: formação de somitos, destacamento da cauda, batimento cardíaco, atrasos no desenvolvimento embrionário, deformações, edemas, alterações de pigmentação e atraso na eclosão). Estes parâmetros poderão implicar alterações na sobrevivência, comportamento e reprodução dos organismos. As alterações no comportamento, medidas por exemplo através do movimento das larvas são um importante parâmetro, principalmente quando se estudam compostos que exercem toxicidade a nível do sistema nervoso (neurotoxicidade). Finalmente, podem ser também medidas alterações em parâmetros bioquímicos por ação dos tóxicos (por exemplo variação na actividade de determinadas enzimas) que permitem inferir o modo de ação dos compostos. Este workshop compreenderá uma componente teórica sucinta de forma a apresentar o modelo animal e as suas principais valências e componente prática constituída pela avaliação do teste FET, determinação da atividade do enzima acetilcolinesterase e avaliação de alterações no comportamento larvar recorrendo ao equipamento Zebrabox (Viewpoint).